基因编辑细菌

基因编辑细菌

Red/ET重组系统是微生物基因编辑最经典的方法，可以实现对DNA分子的敲除、点突变、敲入等多种修饰。该技术已被广泛地用于基因组DNA，如细菌人工染色体、大肠杆菌染色体等的遗传修饰研究以及基因工程药物的研究和开发中。但如何提高基因重组和编辑效率，一直是微生物基因编辑的研究热点，直到CRISPR/Cas9技术的泛起，给微生物基因编辑带来一线曙光。

CRISPR/Cas9是细菌和古细菌在恒久演化历程中形成的一种适应性免疫防御，可用来反抗入侵的病毒及外源DNA。近些年，由于CRISPR-Cas9基因编辑技术操作简朴，基因编辑效率高被广泛应用，是现在用于基因编辑最前沿的方法。

CRISPR-B是源井生物在基于Red/ET重组系统和CRISPR/Cas9基因编辑系统基础上，通过自主研发优化基因编辑载体和基因编辑流程，在基因编辑效率和准确性均远高于传统方法的一项创新性技术。该技术可以广泛应用于细菌和真菌的基因编辑。

CRISPR-B技术优势

基因编辑细菌

基因编辑细菌：源井生物使用CRISPR-B技术通过电转的方法将CRISPR-B系列载体导入细菌中，对细菌举行基因编辑，可实现细菌的敲除，点突变或敲入。

传统的基因敲除技术存在后期筛选事情量大（周期），重组效率低，残留loxP或FRT位点等缺点。CRISPR-B技术作为一种高效的基因组编辑技术，具有操作简朴、靶向性强、脱靶率低、无痕等诸多优势。

CRISPR-B技术可编辑的细菌（节选）：

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技术流程

1. 构建 CRISPR-B细菌系列载体

2. 电转及制备稳转CRISPR-B _CR的感受态

·CRISPR-B _CR电转到细菌中，菌落PCR判定CRISPR-B _CR是否乐成转入。

·并将乐成转入CRISPR-B _CR的菌株再制成电转感受态细胞。

3. 导入CRISPR-B_G及CRISPR-B _D举行打靶

将打靶载体CRISPR-B_G及CRISPR-B _D修复模板电转进稳转CRISPR-B _CR的感受态菌株中，CRISPR系统与Red重组系统配合作用对细菌基因组举行编辑。

4. 挑取单克隆举行PCR及测序判定，将CRISPR-B质粒消去，获得敲除阳性克隆菌株。

质量控制尺度

1. 菌落PCR判定 2.靶位点测序判定

注明 | 文章是源井生物原创，转载请注明。

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