基因敲除稳转株

通过核转染法将gRNA载体（含Cas9）和Donor共转入细胞中，gRNA和Cas9复合物造成靶位点DNA双链断裂后，细胞以外源携带目的点突变的Donor作为模板举行同源重组修复（HDR），将目的点突变重组到基因组靶位点。

gRNA载体携带抗性，可举行药筛，药筛完成后挑选单克隆造就。选择差别的克隆划分举行靶位点扩增及测序，筛选出点突变纯合的阳性克隆。

点突变方案：

服务流程及质量控制

应用案例

PSEN1基因A79V突变可引起阿尔茨海默症。研究讲明，将阿尔茨海默症患者的体细胞诱导为多醒目细胞（iPSC），然后通过用野生型序列替换点突变序列，修正突变的基因。通过研究患者的iPSC和修正后的iPSC，可以得知该突变对细胞表型的影响，从而深入研究该突变的病理性作用。

iPSC中PSEN1基因的序列分析

A_点突变修正后的杂合子测序效果。

B_ 点突变修正后的纯合子测序效果（T>C）

Reference：

Fukuda, N., Senga, Y., & Honda, S.(2019). Anxa2‐and Ctsd‐knockout CHO cell lines to diminish the risk of

contamination with host cell proteins. Biotechnology progress, e2820.

泉源 | 源井生物

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